El documento describe las etapas del desarrollo prenatal desde la concepción hasta el nacimiento, incluyendo el período de gestación, el embrión, el feto y los factores que pueden interrumpir el embarazo. También describe las características del neonato y los cuidados necesarios como la alimentación, manipulación y comunicación. Finalmente, explica varios reflejos presentes en los recién nacidos.
El documento define la economía como la administración de recursos escasos para satisfacer las necesidades humanas. Explica que la economía estudia cómo las sociedades producen, intercambian, distribuyen y consumen bienes y servicios. También analiza el comportamiento humano en relación con la asignación de recursos limitados entre fines alternativos.
1) Edexcel is an examining and awarding body that provides qualifications worldwide. It supports centers that offer education programs to learners through a network of UK and international offices.
2) Candidates' work will be marked according to principles such as marking positively and awarding all marks deserved according to the mark scheme. Subject specialists are available to help with specific content questions.
3) The document provides notes on marking principles for a GCSE mathematics exam, including how to apply the mark scheme and address various student responses.
El documento describe las etapas del desarrollo prenatal desde la concepción hasta el nacimiento, incluyendo el período de gestación, el embrión, el feto y los factores que pueden interrumpir el embarazo. También describe las características del neonato y los cuidados necesarios como la alimentación, manipulación y comunicación. Finalmente, explica varios reflejos presentes en los recién nacidos.
El documento define la economía como la administración de recursos escasos para satisfacer las necesidades humanas. Explica que la economía estudia cómo las sociedades producen, intercambian, distribuyen y consumen bienes y servicios. También analiza el comportamiento humano en relación con la asignación de recursos limitados entre fines alternativos.
1) Edexcel is an examining and awarding body that provides qualifications worldwide. It supports centers that offer education programs to learners through a network of UK and international offices.
2) Candidates' work will be marked according to principles such as marking positively and awarding all marks deserved according to the mark scheme. Subject specialists are available to help with specific content questions.
3) The document provides notes on marking principles for a GCSE mathematics exam, including how to apply the mark scheme and address various student responses.
The document appears to be a presentation given by M.N. Guseva at the 4th All-Russian School on Clinical Immunology in 2013. It discusses agammaglobulinemia, including its historical background identified by Colonel Bruton in 1952, diagnostic criteria according to immunological profiles and genetic testing, typical symptoms at diagnosis, and guidelines for definitive, probable and possible diagnosis. It also notes treatment involves lifelong intravenous immunoglobulin therapy to prevent infections.
The document announces the 14th Annual Candlelight Remembrance hosted by Families & Friends of Murder Victims to honor victims of crime. The event will take place on April 25, 2013 from 6:00-8:00pm at the Rancho Cucamonga Civic Center Courtyard. Attendees are invited to bring pictures and shoes of their loved ones to display. Information is also provided on reserving a table for community agencies and submitting photos for a slideshow. A participation and photo release form is included for the event.
The sixth grade students of Les Acàcies School visited the Delta del Llobregat nature reserve to learn about its important wetlands and observe various bird species. The students were able to see different birds like mallards, geese, and Audouin's gulls using binoculars. They also learned about the Mediterranean orchids that can be found in the delta. The students found the tour very educational as they observed the local plants and birds and took many photographs.
El documento describe las fortalezas y debilidades del trabajo colaborativo, así como un modelo de clase sobre países europeos y sus capitales que utiliza esta metodología. El modelo involucra dividir a los estudiantes en grupos para investigar países o capitales, completar un mapa de Europa en grupos y compartir el producto final en un blog.
This document discusses several topics including tensegrity structures, stamp collecting, and the author's ideas. It contains images and quotes about designing for the future and anticipating needs. The author is Jeremy Tai Abbett from Hamburg, Germany who shares links to his online profiles and work exploring tensegrity concepts. The document ends by thanking the viewer and providing more details on the author's website where this topic is further discussed.
The document appears to be a presentation given by M.N. Guseva at the 4th All-Russian School on Clinical Immunology in 2013. It discusses agammaglobulinemia, including its historical background identified by Colonel Bruton in 1952, diagnostic criteria according to immunological profiles and genetic testing, typical symptoms at diagnosis, and guidelines for definitive, probable and possible diagnosis. It also notes treatment involves lifelong intravenous immunoglobulin therapy to prevent infections.
The document announces the 14th Annual Candlelight Remembrance hosted by Families & Friends of Murder Victims to honor victims of crime. The event will take place on April 25, 2013 from 6:00-8:00pm at the Rancho Cucamonga Civic Center Courtyard. Attendees are invited to bring pictures and shoes of their loved ones to display. Information is also provided on reserving a table for community agencies and submitting photos for a slideshow. A participation and photo release form is included for the event.
The sixth grade students of Les Acàcies School visited the Delta del Llobregat nature reserve to learn about its important wetlands and observe various bird species. The students were able to see different birds like mallards, geese, and Audouin's gulls using binoculars. They also learned about the Mediterranean orchids that can be found in the delta. The students found the tour very educational as they observed the local plants and birds and took many photographs.
El documento describe las fortalezas y debilidades del trabajo colaborativo, así como un modelo de clase sobre países europeos y sus capitales que utiliza esta metodología. El modelo involucra dividir a los estudiantes en grupos para investigar países o capitales, completar un mapa de Europa en grupos y compartir el producto final en un blog.
This document discusses several topics including tensegrity structures, stamp collecting, and the author's ideas. It contains images and quotes about designing for the future and anticipating needs. The author is Jeremy Tai Abbett from Hamburg, Germany who shares links to his online profiles and work exploring tensegrity concepts. The document ends by thanking the viewer and providing more details on the author's website where this topic is further discussed.
1. Многоцветный анализ – основные
принципы и подходы
Кудрявцев Игорь Владимирович*
igorek1981@yandex.ru
Савицкий Валерий Павлович**
vsavitski@beckman.com
* отдел иммунологии, ФГБУ «НИИ экспериментальной медицины» СЗО РАМН,
Санкт-Петербург;
кафедра цитологии и гистологии, Санкт-Петербургский государственный
университет;
школа биомедицины, Дальневосточный федеральный университет, Владивосток
** ООО "Бекмен Культер", Москва
Пушкинские годы, 27 января – 2 февраля 2013 г.
2. Для чего нужен многоцветный анализ?
• Оптимален и необходим для онкогематологии –
типирование лейкозов и лимфом
• Повышает информативности
иммунологических исследований:
– большее число комбинаций
– большее число Ag определяется на одной
клетке
– детальная характеристика фенотипа
отдельных клеточных популяций
– анализ как основных, так и малых
популяций по широкому спектру маркеров
•Увеличивает информативность научных
исследований
•Меньше пробирок в панели – экономия времени,
трудозатрат и сопутствующих реагентов!
•Большая пропускная способность проточного
цитометра, экономия «ресурса» прибора
3. Флуорохромы для многоцветного анализа
В настоящее время – более 40 различных флуорохромов; однако
одновременно можно использовать не более 18 флуорохромов даже на
самых «продвинутых» приборах.
5. Новые флуорохромы -
новые требования к подготовке образцов
- работа с антителами должно проводиться в отсутствие прямого
солнечного света;
- инкубация образцов с антителами темноте;
- хранение готовых проб в защищенном от света месте и на холоду
(+4°С); Инкубация в темноте
Инкубация на свету, 15 минут
6. Новые флуорохромы -
новые требования к подготовке образцов
- использование готовых смесей антител;
- самостоятельная подготовка «коктейлей» антител перед окраской образцов;
- тандемные красители следует вносить в смесь последними, чтобы
минимизировать их облучение светом;
Все это позволяет:
600
- упростить работу с реагентами;
- сократить время подготовки
проб;
400 533
- снизить вероятность ошибок
при внесении антител!!!
200
Подготовка для анализа 5
пробирок, в каждой – 5
142 антител, конъюгированных с
5 различными
0 флуорохромами
Одноцветные Пятицветные
реагенты панели
7. Итак, 3 лазера и 10 каналов для детекции 10
флуорохромов одновременно…
… КОМПЕНСАЦИЯ!!! APC or AF647
APC or AF647 APC-AF700
APC-AF700 APCCy7 or APC-AF750
APCCy7 or APC-AF750
635nm
FITC
FITC PE
PE ECD
ECD PECy5.5
PECy5.5 PECy7
PECy7
488nm
Pacific Blue
Pacific Blue Krome Orange
Krome Orange
405nm
400 500 600 700 800
8. Вариант №1.
Минимизировать компенсацию - использовать антитела с
флуорохромами, спектры которых слабо перекрываются
Pac Kr FITC PE ECD PC5.5 PC7 APC APC APC
Blue Orange AF700 AF750
CD25 CD3 CD8 - - CD4 CD3 CD45 - -
12. Многоцветная компенсация – некоторые
частные вопросы:
Расположение маркеров по каналам:
- для пан-лейкоцитарных, линейных и «ярких» маркеров
используйте фиолетовый лазер;
- для маркеров «популяций интереса» - красный лазер;
- маркеры активации и «маркеры интереса» ставьте на голубой
лазер.
Применяйте тандемные красители с тем расчетом, что тандемы,
содержащие Cy5 / Cy5.5 / Cy7, возбуждаются голубым и красным
лазерами, следовательно, помещайте маркеры со среднем
уровнем экспрессии, а также маркеры малых популяций на
голубой лазер.
Для субпопуляционных/взаимоисключающих маркеров можно
использовать пары: ECD - PC5.5, PC5 - APC, PC5.5 – APCA700,
PC7 - APCA750 или PE - ECD
13. Некоторые рекомендации по подбору
флуорохромов для минимизации многоцветной
компенсации
1. Для детекции антигенов с низким уровнем экспрессии
следует использовать яркие флуорохромы, антигены с
высоким уровнем экспрессии одинаково хорошо работают со
всеми красителями
2. Для исследования слабо представленных антигенов НЕ
следует использовать соседние – «соприкасающиеся»,
перекрывающиеся - каналы, на которых располагаются
антигенами с высоким уровнем экспрессии
3. Разрешается, но не рекомендуется, использовать «соседние»
каналы для ярких «неперекрывающихся» -
взаимоисключающих антигенов
4. Не рекомендуется использовать соседние каналы для
коэкспрессирующихся антигенов
5. Допускается применение субпопуляционных маркеров на
каналах, сильно «засвечивающих» основные маркеры, НО не
наоборот
14. 1. Для детекции антигенов с низким уровнем
экспрессии следует использовать яркие
флуорохромы…
CD25-PE CD25-PC7
CD56-PE P-AKT s473 Alexa 647
15. … антигены с высоким уровнем экспрессии
одинаково хорошо работают со всеми
красителями.
FITC PE ECD PC5 PECy5.5 PC7
APC Alexa 700 APCAlexa 700 APC-H7 APCAlexa 750
Pacific Blue Pacific Orange
CD8
16. 2. Для исследования слабо представленных антигенов НЕ
следует использовать соседние – «соприкасающиеся»,
перекрывающиеся - каналы с антигенами с высоким уровнем
экспрессии
HLA-DR-PE –
является ли это
оптимальным
выбором?
(CD45 берем по FITC)
17. 2. Для исследования слабо представленных антигенов НЕ
следует использовать соседние – «соприкасающиеся»,
перекрывающиеся - каналы с антигенами с высоким уровнем
экспрессии
CD45, конъюгирован с
Pacific Blue.
HLA-DR-FITC
разрешение гораздо
лучше, чем при
использовании HLA-
DR-PE
18. 3. Разрешается, но не рекомендуется, использовать
«соседние» каналы для ярких неперекрывающихся
антигенов
CD4-APC
CD20-APCAF700
CD8-APCAF750
CD4-PacBlue
CD20-ECD
CD8-APCAF700
M utually excluding antigens serve each other as dump channels
19. 4. Не рекомендуется использовать соседние каналы
для ко-экспрессирующихся антигенов
PC5,5 на ECD – до 45%
ECD на PC5,5 – до 4%
PE/APCAF750 и
APCAF750/PE –
менее 0,5%
20. 5. Допускается применение субпопуляционных
маркеров на каналах, сильно «засвечивающих»
основные маркеры, НО не наоборот
21. Настройка прибора при многоцветном анализе
• Настройка напряжения. Для настройки напряжения используйте
соответствующие изотипические контроли или образцы, окрашенные
антителами по отдельности.
• Компенсация. Для настройки:
– используйте CD45, конъюгированные с различными
флуорохромами для автоматической настройки компенсации;
– используйте образны, окрашенные каждым из антител по
отдельности;
– для проверки правильности настройки компенсации используйте
FMO-подход (fluorescence-minus-one);
при переходе на другой лот антител проверяйте компенсацию!
Процедуру настройки рекомендуется проводить с использованием всех
перечисленных выше подходов. После настройки и проверки –
НИЧЕГО НЕ МЕНЯЙТЕ!!!!
23. Для корректного сбора данных необходимы следующие
гистограммы:
-FS vs. SS – выделение популяций
лимфоцитов, моноцитов
и гранулоцитов (гистограмма “Ungated”
- отображены все популяции лейкоцитов)
-CD45 vs. SS – выделение
популяции лимфоцитов
(гистограмма “Ungated” –
отображены все популяции
лейкоцитов)
24. Для корректного сбора данных необходимы следующие
гистограммы:
- двухпараметрические гистограммы «флуоресценция vs. SS» – контроль
корректности выставленного напряжения по каждому из каналов
флуоресценции (все гистограммы “Ungated” – все популяции лейкоцитов)
25. Для корректного сбора данных необходимы следующие
гистограммы:
-CD45 vs. SS и FS vs. SS –
выделение популяции лимфоцитов;
удаление из зоны анализа
разрушенных и слипшихся клеток
При анализе «редких» популяций клеток также рекомендуется удалять из зоны
анализа дуплеты клеток (соотношение пикового и интегрального сигналов,
например) и использовать по одному из каналов флуоресценции какой-либо
краситель для определения жизнеспособности клеток (например, кальцин по FL1
или 7-AAD по FL4)
26. Для корректного сбора данных необходимы следующие
гистограммы:
- двухпараметрические гистограммы «флуоресценция-против-
флуоресценции» - контроль корректности настройки компенсации (на всех
гистограммах отображены ТОЛЬКО клетки интереса!!!)
27. T/B/NK, маркеры «ранней» и «поздней» активации
8-цветная комбинация
Цель исследования:
Выделить популяции B-лимфоцитов, NK- и NKT-клетки, а также CD4+ and CD8+ Т-клетки
Оценить уровень экспрессии активационных маркеров на примере CD25 и HLA-DR
Расположение антител по каналам:
488 Excitation 633 Excitation
FITC PE ECD PC5.5 PC7 APC APC-A700 APC-A750
HLA-DR CD4 CD3 CD56 CD25 CD8 CD19 CD45
IM1638U A07751 A07748 A79388 A52882 IM2469 A78837 A79392
Материал: - периферическая кровь
Пробоподготовка: - лизис эритроцитов при помощи VersaLyse (A09777) + IOTest 3
Fixative (A07799), без отмывки, внесение по завершении лизиса эритроцитов
чаcтиц Flow-Count (7547053) для абсолютного счета.
Сбор данных – NaviosTM
(2 лазера, 8 цветов), обработка данных - KaluzaTM
32. T/B/NK, популяции наивных клеток и клеток памяти,
уровень экспрессии CD38 (8-цветная комбинация)
Цель исследования:
Выделить популяции B-лимфоцитов, NK- и NKT-клетки, а также CD4+ and CD8+ Т-клетки
Среди популяций Т-хелперов и цитотоксический Т-клеток выделить популяции наивных клеток,
центральных и эффекторных клеток памяти, а также «терминально-дифференцированных»
эффекторных клеток.
Определить уровень экспрессии активационного маркера CD38 на всех перечисленных выше
популяциях клеток
Расположение антител по каналам:
488 Excitation 633 Excitation
FITC PE ECD PC5.5 PC7 APC APC-A700 APC-A750
CD38 CD62L CD45R0 CD56 CD3 CD4 CD19 CD8
A07778 IM2214U IM2712U A79388 737657 IM2468 A78837 A94683
Материал: - периферическая кровь
Пробоподготовка: - лизис эритроцитов при помощи VersaLyse (A09777) + IOTest 3
Fixative (A07799), без отмывки, внесение по завершении лизиса эритроцитов
чаcтиц Flow-Count (7547053) для абсолютного счета.
Сбор данных – NaviosTM
(2 лазера, 8 цветов), обработка данных - KaluzaTM